针茅属植物RAPD条件优化Optimal of RAPD amplification on Stipa L.
赵萌莉,韩冰,张红梅,万雪龙,张刚
摘要(Abstract):
本试验以针茅属 ( Stipa L.)植物为材料 ,使用 CTAB法提取其基因组 DNA,通过对 RAPD( Random amplified polymorphic NDA,随机扩增的多态性 )条件优化分析 ,初步确定了针茅属植物 RAPD的最佳方案 ,即在 PCR扩增程序为 94℃预变性 3min,94℃变性 1 min,37℃复性 1 min,72℃延伸 1 .5 min,设 45个循环 ,最后 72℃保温 5 min时 ,2 5μL反应体系中包括 :0 .2 μL( 1 0 mmol/L) d NTPs,2 .0 μL( 1 0 mmol/L) Mg2 + ,0 .5 μL( 1 0 0 pmol/μL)引物 ,模板DNA80 ng,Taq酶 ( Sangon) 1 .0 U,2 .5 μL1 0×buffer缓冲液 ,其余部分用无菌三蒸水补平可以得到较好的扩增结果。
关键词(KeyWords): 针茅属植物;RAPD;条件优化
基金项目(Foundation): 国家自然基金 (批准号 :30 0 6 0 0 15 );; 内蒙古自然基金 (批准号 :2 0 0 0 130 3)资助项目。
作者(Author): 赵萌莉,韩冰,张红梅,万雪龙,张刚
参考文献(References):
- [1]卢 江,基因定位及其在园艺作物遗传育种中的应用[J].园艺学年评,1995.1:165-179
- [2]彭秀玲、袁汉英等,基因工程实验技术[M].湖南科学技术出版社,1997
- [3]种康、徐乃正等,聚合酶链反应(PCR)对未知序列DNA的扩增技术[J]植物生理学通讯,1993.29(2):116-118
- [4]赵萌莉,红树植物秋茄(K andelia candel(L.)Druce)的遗传变异与分化的生态遗传学研究.博士学位论文,2000.5
- [5]Welsh,J.andMcClelland,M.,1990.Fingerprinting genomes usingPCR with arbitraryPrimers,Nucleic analysis inAllium,TheorAp-plGenet.,86:497-504
- [6]Yu,K.andPauls,K.P.,1992,Optimization of hePCR program forRAPD analysis.NucleicAcidsResearch,20(10):2606
- [7]胡志昂,恽锐,钟敏等,1997,检测植物DN A扩增多态性方法的比较和改进[J].植物学报,39(2)144-148
- [8]戴思兰,DNA遗传标记技术在林业生产中的应用[J].生物工程进展,1996,16(3):44-48